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如何測定肽純度

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不同標(biāo)準(zhǔn)下肽純度的應(yīng)用

低純度（>50%）：該水平適用于先導(dǎo)化合物的高通量篩選。如果您正在研究免疫應(yīng)答，除去特定的污染物，>70%可以用于抗原制備。

中等純度（>70%）：該水平足以生產(chǎn)、純化和測試免疫測定中使用的抗體、進(jìn)行酶底物研究、表位作圖、親和純化、生物測定或其他免疫學(xué)應(yīng)用以及肽篩選。生物化學(xué)和半定量應(yīng)用可能需要達(dá)到>85%的純度。例如酶學(xué)、表位作圖或研究生物活性、酶-底物相互作用、磷酸化作用和蛋白質(zhì)印記或細(xì)胞黏附中的肽封閉等。

高濃度（>90%）：該水平適用于定量生物測定、定量體外受體-配體相互作用研究、配體結(jié)合的生物活性研究、定量阻斷和競爭性抑制試驗(yàn)、定量磷酸化和蛋白水解研究、電泳標(biāo)記和色譜標(biāo)準(zhǔn)分析。

純度（>98%）：該純度適用于肽作為藥物進(jìn)行體內(nèi)研究、臨床試驗(yàn)、藥物測試以及結(jié)構(gòu)活性關(guān)系研究。

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優(yōu)化合成以達(dá)到所需濃度

序列分析：例如使用軟件在合成之前進(jìn)行合成預(yù)測，以確定在整個合成過程中是否存在合成難度很大的區(qū)域。

副反應(yīng)風(fēng)險評估：例如外消旋化。有許多策略可以降低副反應(yīng)的風(fēng)險或有助于提高單個偶聯(lián)反應(yīng)的效率，包括偽脯氨酸、二肽構(gòu)建塊、添加劑以及替代側(cè)鏈保護(hù)。

樹脂選擇：SPPS通常在與1%二乙烯基苯（DVB）交聯(lián)的聚苯乙烯上進(jìn)行。替代品包括聚乙二醇（PEG）衍生物，樹脂的選擇會影響合成成功率和粗品的純度。連接到柱上的連接物提供生長肽和固相載體之間的可逆連接，并確定最終產(chǎn)物的性質(zhì)和可使用的化學(xué)性質(zhì)。接頭的選擇決定了最終產(chǎn)物中的C端官能團(tuán)。

 偶聯(lián)化學(xué)：選擇通常取決于合成速度，較快的合成需要比較慢的合成（DIC、HBTU）更高反應(yīng)性（=不穩(wěn)定）的偶聯(lián)試劑（HCTU、HATU和COMU）。反應(yīng)溫度會影響偶聯(lián)化學(xué)的選擇。

反應(yīng)溫度：提高溫度可能會加快合成并提高純度，但并不總是如此。需要注意的是，基于微波的加熱只是加熱，微波本身對合成沒有特殊影響。

監(jiān)控脫保護(hù)：能夠通過實(shí)時紫外監(jiān)測來監(jiān)控，例如脫保護(hù)步驟的效率對于優(yōu)化是非常重要的。

 雙重耦合：預(yù)測軟件確定的困難耦合可以通過雙重耦合、延長耦合時間或添加更多等效物來處理。

空間位阻：偶聯(lián)試劑必須足夠快速，以便可以引入空間位阻氨基酸。

封端：這樣做是為了在偶聯(lián)反應(yīng)后阻斷任何未反應(yīng)的氨基，或使完整肽的N-末端乙酰化。它對于在合成困難或長肽期間最小化缺失產(chǎn)物和輔助純化過程是有很用的。

溶劑使用：始終使用新鮮溶劑。重復(fù)使用溶劑會降低純度。

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選擇一種能夠快速合成高純度肽的多肽合成儀